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"METABOLOMICS WORKBENCH":{"STUDY_ID":"ST002903","ANALYSIS_ID":"AN004764","VERSION":"1","CREATED_ON":"04-30-2024"},

"PROJECT":{"PROJECT_TITLE":"A metabolomics pipeline highlights microbial metabolism in bloodstream infections","PROJECT_SUMMARY":"The growth of antimicrobial resistance (AMR) highlights an urgent need to identify bacterial pathogenic functions that may be targets for clinical intervention. Although severe infections profoundly alter host metabolism, prior studies have largely ignored microbial metabolism in this context. Here we describe an iterative, comparative metabolomics pipeline to uncover microbial metabolic features in the complex setting of a host and apply it to investigate gram-negative bloodstream infection (BSI) in patients. The data from each stage of this analysis pipeline are included here. We find elevated levels of bacterially-derived acetylated polyamines during BSI and discover the enzyme responsible for their production (SpeG). Blocking SpeG activity reduces bacterial proliferation and slows pathogenesis. Reduction of SpeG activity also enhances bacterial membrane permeability and increases intracellular antibiotic accumulation, allowing us to overcome AMR in culture and in vivo. This study highlights how tools to study pathogen metabolism in the natural context of infection can reveal and prioritize new therapeutic strategies for addressing challenging infections.","INSTITUTE":"Broad Institute of MIT and Harvard","DEPARTMENT":"Metabolomics Platform","LAST_NAME":"Clish","FIRST_NAME":"Clary","ADDRESS":"415 Main Street, Cambridge, MA, 02142, USA","EMAIL":"clary@broadinstitute.org","PHONE":"617-714-7654","PUBLICATIONS":"submitted","DOI":"http://dx.doi.org/10.21228/M84Q6N","CONTRIBUTORS":"Courtney Beaulieu, Amy Deik, Kerry Pierce, Clary B. Clish, Jared R. Mayers, Jack Varon, Ruixuan R. Zhao, Martin Daniel-Ivad, , Amrisha Bholse, Nathanial R. Glasser, Franziska M. Lichtenauer, Julie Ng, Mayra Pinilla Vera, Curtis Huttenhower, Mark A. Perrella, Sihai D. Zhao, Rebecca M. Baron, Emily P. Balskus"},

"STUDY":{"STUDY_TITLE":"Identification and targeting of microbial putrescine acetylation in bloodstream infections","STUDY_TYPE":"comparison of septic shock versus control plasma","STUDY_SUMMARY":"To identify bacterial metabolites elevated in human plasma during infection, we performed metabolomics on an existing cohort of patient plasma samples from 21 septic shock patients admitted to the intensive care unit (ICU) with culture positive gram-negative BSIs (Escherichia coli, Klebsiella spp., Pseudomonas spp.) who had banked blood samples drawn contemporaneously or near-contemporaneously with their positive blood cultures as well from 22 controls admitted to the ICU for other reasons.","INSTITUTE":"Broad Institute of MIT and Harvard","DEPARTMENT":"Metabolomics Platform","LAST_NAME":"Clish","FIRST_NAME":"Clary","ADDRESS":"415 Main Street, Cambridge, MA, 02142, USA","EMAIL":"clary@broadinstitute.org","PHONE":"617-714-7654","SUBMIT_DATE":"2023-10-02"},

"SUBJECT":{"SUBJECT_TYPE":"Human","SUBJECT_SPECIES":"Homo sapiens","TAXONOMY_ID":"9606","AGE_OR_AGE_RANGE":"22-93","GENDER":"Male and female"},
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],
"COLLECTION":{"COLLECTION_SUMMARY":"Patient samples were selected from the pre-existing Registry of Critical Illness (RoCI) cohort, housed at Brigham and Women’s Hospital (BWH) in Boston, MA, USA. RoCI is approved by the Partners Human Research Committee. Informed consent was obtained for blood collection. Curation of the database identified 21 patients with positive blood cultures growing either Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, or Pseudomonas aeruginosa with contemporaneous or near contemporaneous plasma samples banked and available for metabolomic analysis. Twenty-two controls admitted to the intensive care unit for reasons other than septic shock were identified for use as controls.","SAMPLE_TYPE":"Blood (plasma)","STORAGE_CONDITIONS":"-80℃"},

"TREATMENT":{"TREATMENT_SUMMARY":"No treatment was used in the study"},

"SAMPLEPREP":{"SAMPLEPREP_SUMMARY":"Plasma samples were thawed on ice and aliquoted to prepare extracts for three different LC-MS methods: HILIC-pos: 10 µL of plasma sample was extracted using 90 µL of acetonitrile/methanol/formic acid (74.9:24.9:0.2 v/v/v) containing stable isotope-labeled internal standards (valine-d8, Sigma-Aldrich; St. Louis, MO; and phenylalanine-d8, Cambridge Isotope Laboratories; Andover, MA). The samples were centrifuged (10 min, 9,000 x g, 4°C), and the supernatants were transferred to autosampler vials containing deactivated glass inserts. HILIC-neg: 30 µL of each plasma sample was extracted using 120 µL of 80% methanol containing inosine-15N4, thymine-d4 and glycocholate-d4 internal standards (Cambridge Isotope Laboratories; Andover, MA). The samples were centrifuged (10 min, 9,000 x g, 4°C), and the supernatants were transferred to autosampler vials containing deactivated glass inserts. C8-pos: 10 µL of plasma sample was extracted using 190 µL of isopropanol containing 1,2-didodecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (Avanti Polar Lipids; Alabaster, AL). The samples were centrifuged (10 min, 9,000 x g, ambient temperature), and the supernatants were transferred to autosampler vials containing deactivated glass inserts."},

"CHROMATOGRAPHY":{"CHROMATOGRAPHY_SUMMARY":"C8-pos: Reversed-phase C8 chromatography analysis of polar and nonpolar lipids in the positive ionization mode","INSTRUMENT_NAME":"Shimadzu Nexera X2","COLUMN_NAME":"Waters ACQUITY UPLC BEH C8 (2.1 mm X 100 mm,1.7 µm,130Å)","COLUMN_TEMPERATURE":"40","FLOW_GRADIENT":"0-1 min, isocratic 20% B; 1-3 min, gradient to 80% B; 3-10 min, gradient to 100% B; 10-13 min, isocratic 100% B; 13-14 min, gradient to 20% B","FLOW_RATE":"450 uL/min","SOLVENT_A":"95% water/5% methanol; 0.1% formic acid; 10 mM ammonium acetate","SOLVENT_B":"100% methanol; 0.1% formic acid","CHROMATOGRAPHY_TYPE":"Reversed phase"},

"ANALYSIS":{"ANALYSIS_TYPE":"MS"},

"MS":{"INSTRUMENT_NAME":"Thermo Exactive Plus Orbitrap","INSTRUMENT_TYPE":"Orbitrap","MS_TYPE":"ESI","MS_COMMENTS":"MS analyses were carried out using electrospray ionization in the positive ion mode using full scan analysis over 200–1100 m/z at 70,000 resolution and 3 Hz data acquisition rate. Other MS settings were: sheath gas 50, in source CID 5 eV, sweep gas 5, spray voltage 3 kV, capillary temperature 300°C, S-lens RF 60, heater temperature 300°C, microscans 1, automatic gain control target 1e6, and maximum ion time 100 ms. Representative standards from each lipid class were used to identify lipids based on RT and m/z patterns, and characteristic product ion spectra. Lipid identities were denoted by total acyl carbon number and total number of double bond number.","ION_MODE":"POSITIVE"},

"MS_METABOLITE_DATA":{
"Units":"integrated peak area",

"Data":[{"Metabolite":"7-Dehydrodesmosterol","392":"11574.0000","419":"10021.0000","561":"6909.0000","594":"10569.0000","596":"8385.0000","597":"7429.0000","598":"6631.0000","600":"7895.0000","650":"7821.0000","658":"7057.0000","694":"8060.0000","698":"7345.0000","700":"10984.0000","701":"6195.0000","704":"6803.0000","705":"7993.0000","710":"7088.0000","712":"7203.0000","718":"10893.0000","719":"15051.0000","720":"6660.0000","721":"8543.0000","287":"8531.0000","289":"8726.0000","328":"7470.0000","348":"8110.0000","372":"7457.0000","383":"7602.0000","399":"6829.0000","405":"7289.0000","422":"6863.0000","435":"7442.0000","443":"6673.0000","464":"6768.0000","473":"9318.0000","488":"6374.0000","539":"7616.0000","541":"6576.0000","565":"6651.0000","575":"6342.0000","602":"6791.0000","633":"7489.0000","716":"6738.0000"},{"Metabolite":"C14:0 CE","392":"32264.0000","419":"180083.0000","561":"52361.0000","594":"221807.0000","596":"102762.0000","597":"44798.0000","598":"142140.0000","600":"24684.0000","650":"94240.0000","658":"264943.0000","694":"158883.0000","698":"357752.0000","700":"234648.0000","701":"283946.0000","704":"240447.0000","705":"140808.0000","710":"188004.0000","712":"67530.0000","718":"21391.0000","719":"","720":"59600.0000","721":"109165.0000","287":"20860.0000","289":"91092.0000","328":"68573.0000","348":"252908.0000","372":"48380.0000","383":"64269.0000","399":"93665.0000","405":"140909.0000","422":"228535.0000","435":"26800.0000","443":"65788.0000","464":"137003.0000","473":"222792.0000","488":"193127.0000","539":"64890.0000","541":"21883.0000","565":"82738.0000","575":"56832.0000","602":"68054.0000","633":"47837.0000","716":"98051.0000"},{"Metabolite":"C14:0 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