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"METABOLOMICS WORKBENCH":{"VERSION":"1","CREATED_ON":"November 16, 2016, 9:54 am"},

"PROJECT":{"PROJECT_TITLE":"Human salivary metabolomics studies","PROJECT_SUMMARY":"Metabolic profiling studies on saliva samples from human subjects with varying levels of periodontal inflammation severity","INSTITUTE":"Osaka University","DEPARTMENT":"Preventive Dentistry","LAST_NAME":"Kuboniwa","FIRST_NAME":"Masae","ADDRESS":"1-8 Yamadaoka, Suita, Osaka, 565-0871, Japan","EMAIL":"kuboniwa@dent.osaka-u.ac.jp","PHONE":"+81-6-6879-2922"},

"STUDY":{"STUDY_TITLE":"Distinct signatures of dental plaque metabolic byproducts dictated by periodontal inflammatory status","STUDY_SUMMARY":"Onset of chronic periodontitis is associated with an aberrant polymicrobial community, termed dysbiosis. Findings of a recent model of its etiology suggested that dysbiosis holds a conserved metabolic signature as an emergent property. The purpose of this study was to identify robust biomarkers for periodontal inflammation severity. Furthermore, we investigated disease-associated metabolic signatures of periodontal microbiota using a salivary metabolomics approach. Collection of whole saliva samples was performed before and after removal of supragingival plaque (debridement). Periodontal inflamed surface area (PISA) was employed as an indicator of periodontal inflammatory status. Based on multivariate analyses using pre-debridement salivary metabolomics data, we found that the metabolites associated with higher PISA included cadaverine and hydrocinnamate, while uric acid and ethanolamine were associated with lower PISA. Next, we focused on dental plaque metabolic byproducts by selecting significantly decreased salivary metabolites following debridement. Metabolite set enrichment analysis revealed that polyamine metabolism, arginine and proline metabolism, butyric acid metabolism, and lysine degradation were distinctive metabolic signatures of dental plaque in the high PISA group, which may have relevance to the metabolic signatures of disease-associated communities. Collectively, our findings identified potential biomarkers of periodontal inflammatory status, while they also provide insight into metabolic signatures of dysbiotic communities.","INSTITUTE":"Osaka University Graduate School of Dentistry","DEPARTMENT":"Preventive Dentistry","LAST_NAME":"Kuboniwa","FIRST_NAME":"Masae","ADDRESS":"1-8 Yamadaoka, Suita, Osaka, 565-0871, Japan","EMAIL":"kuboniwa@dent.osaka-u.ac.jp","PHONE":"+81-6-6879-2922"},

"SUBJECT":{"SUBJECT_TYPE":"Human","SUBJECT_SPECIES":"Homo sapiens","TAXONOMY_ID":"9606"},
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"COLLECTION":{"COLLECTION_SUMMARY":"The subjects were asked to refrain from brushing and using mouthwash for at least 1 hour prior to sample collection and periodontal examinations. We collected a minimum of 3 mL of unstimulated whole saliva between 1:00 and 3:00 p.m. Thereafter, saliva was sampled again at 15 minutes following removal of supragingival plaque and calculus with an ultrasonic scaler (debridement). Finally, 1 ml of each sample was immediately frozen with liquid nitrogen and stored at -80°C until analysis.","SAMPLE_TYPE":"Saliva"},

"TREATMENT":{"TREATMENT_SUMMARY":"Debridement was performed with an ultrasonic scaler, as described in “Collection Summary”. To maintain the subgingival microbiota and avoid bleeding, we avoided insertion of the scalar tip into the gingival sulcus."},

"SAMPLEPREP":{"SAMPLEPREP_SUMMARY":"Frozen saliva samples were freeze-dried overnight using a freeze-dryer (VD-800F; TAITEC, Saitama, Japan), and metabolites were extracted with 1 ml of MeOH/H2O/CHCl3 (5/2/2, v/v/v). As an internal standard, 60 µl of ribitol (0.2 mg/ml) was added to the mixture. The sample was centrifuged at 16,000 g for 3 min at 4 °C, and the supernatant (900 µl) was transferred to another microtube and mixed with 400µl of water. After centrifugation at 16,000 g for 3 min at 4 °C, 800µl of the supernatant was transferred to another microtube whose cap was pierced. The extract was evaporated using a vacuum centrifuge dryer for 2 h in order to remove methanol, then freeze-dried overnight. For derivatization, 100 µl of methoxyamine hydrochloride (20 mg/ml in pyrimidine) and 50 µl of N-methyl-N-(trimethylsilyl)trifluoroacetamide were employed. The sample was then used for GCMS analysis, and a 1 µL of sample was injected in split mode (25/1, v/v)."},

"CHROMATOGRAPHY":{"CHROMATOGRAPHY_SUMMARY":"The device used was GCMS-QP2010 ultra (Shimadzu Inc., Kyoto, Japan) equipped with a 30 m × 0.25 mm i.d. fused silica capillary column coated with 0.25 µm CP-SIL 8 CB low bleed (Varian Inc., Palo Alto, CA) and AOC-20i (Shimadzu) as an autosampler. The injection temperature was 230 °C. The helium gas flow rate through the column was 1.12 ml/min. The column temperature was held at 80 °C for 2 min and then raised by 15 °C /min to 330 °C and held for 6 min. The transfer line and the ion source temperatures were 250 °C and 200 °C, respectively. Ions were generated by a 70 kV electron impact (EI), and 20 scans/sec were recorded over the mass range 85-500. A standard alkane mixture (C8-C40) was injected at the beginning of the analysis for subsequent identification of metabolites.","CHROMATOGRAPHY_TYPE":"GC","INSTRUMENT_NAME":"Shimadzu GCMS-QP2010 ultra","COLUMN_NAME":"a 30 m × 0.25 mm i.d. fused silica capillary column coated with 0.25 µm CP-SIL 8 CB low bleed (Varian Inc., Palo Alto, CA) 8 CB low bleed (Varian Inc., Palo Alto, CA)","FLOW_RATE":"The helium gas flow rate through the column was 1.12 ml/min.","COLUMN_TEMPERATURE":"The column temperature was held at 80 °C for 2 min and then raised by 15 °C /min to 330 °C and held for 6 min.","SAMPLE_INJECTION":"1 µL"},

"ANALYSIS":{"ANALYSIS_TYPE":"MS"},

"MS":{"MS_COMMENTS":"-","INSTRUMENT_NAME":"Shimadzu QP2010 Ultra","INSTRUMENT_TYPE":"GC-TOF","MS_TYPE":"EI","ION_MODE":"POSITIVE"},

"MS_METABOLITE_DATA":{
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