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"METABOLOMICS WORKBENCH":{"STUDY_ID":"ST002327","ANALYSIS_ID":"AN003796","VERSION":"1","CREATED_ON":"October 27, 2022, 1:23 pm"},

"PROJECT":{"PROJECT_TITLE":"DJ1 KO effect on midbrain organoids","PROJECT_SUMMARY":"DJ1/PARK7 KO human iPSCs and corresponding isogenic controls were differentiated into midbrain organoids. The organoids were collected in different timepoints and submitted to LC-MS/MS for hybrid metabolomics analysis. The objective was to track alterations in glycolysis-related metabolites in different timepoints in the PARK7/DJ1 KO mutation.","INSTITUTE":"Icahn School of Medicine at Mount Sinai","LAST_NAME":"Morrone Parfitt","FIRST_NAME":"Gustavo","ADDRESS":"1 Gustave L. Levy Pl,, New York, NY, 10029, USA","EMAIL":"gustavo.parfitt@mssm.edu","PHONE":"212-659-5993"},

"STUDY":{"STUDY_TITLE":"Effect of PARK7 gene KO on midbrain organoids","STUDY_SUMMARY":"DJ1 KO was generated in BJsips iPSC and differentiated into midbrain organoids with the respective iPSC controls. The midbrain organoids were collected at day 40, 100 and 200 after differentiation.","INSTITUTE":"Icahn School of Medicine at Mount Sinai","LAST_NAME":"Morrone Parfitt","FIRST_NAME":"Gustavo","ADDRESS":"One Gustave L. Levy Place, Box 1065","EMAIL":"gustavo.parfitt@mssm.edu","PHONE":"212-659-5993"},

"SUBJECT":{"SUBJECT_TYPE":"Cultured cells","SUBJECT_SPECIES":"Homo sapiens","TAXONOMY_ID":"9606"},
"SUBJECT_SAMPLE_FACTORS":[
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"COLLECTION":{"COLLECTION_SUMMARY":"Midbrain organoids of day 40, 100 and 200 had a media change 2h prior collection. 5 organoids spheres were added to 1.5 ml tubes and washed in cold PBS twice. The tubes were them frozen in liquid nitrogen.","COLLECTION_PROTOCOL_FILENAME":"metabolomics_methods.pdf","SAMPLE_TYPE":"Brain"},

"TREATMENT":{"TREATMENT_SUMMARY":"Organoids bearing PARK7/DJ1 KO mutation were used together with isogenic CTR cell lines (BJSIPS)"},

"SAMPLEPREP":{"SAMPLEPREP_SUMMARY":"After colection,the organoids were extracted in 1 mL/well of 80:20 (v/v) methanol:water with 0.01 ng/mL Val-d8 and Phe-d8 internal extraction standards. extraction solvent was dried under nitrogen gas and metabolite samples were stored at −80 °C until analysis.","SAMPLEPREP_PROTOCOL_FILENAME":"metabolomics_methods.pdf"},

"CHROMATOGRAPHY":{"CHROMATOGRAPHY_SUMMARY":"The LC column was a Millipore TMZIC-pHILIC (2.1x150 mm, 5μm) coupled to a Dionex Ultimate 3000TM system and the column oven temperature was set to 25oC for the gradient elution. A flow rate of 100μL/min was used with the 10 mM ammonium carbonate in water (A), pH 9.0, and acetonitrile (B). The gradient profile was 80-20% B (0-30min), 20-80% B (30-31min), 80-80% B (31-42min). Injection volume was set to 2 μL for all analyses (42min total run time per injection).","CHROMATOGRAPHY_TYPE":"HILIC","INSTRUMENT_NAME":"Dionex Ultimate 3000TM","COLUMN_NAME":"Millipore(TM) ZIC-pHILIC","METHODS_FILENAME":"metabolomics_methods.pdf"},

"ANALYSIS":{"ANALYSIS_TYPE":"MS","ANALYSIS_PROTOCOL_FILE":"metabolomics_methods.pdf"},

"MS":{"INSTRUMENT_NAME":"Thermo Q Exactive HF hybrid Orbitrap","INSTRUMENT_TYPE":"Orbitrap","MS_TYPE":"ESI","ION_MODE":"POSITIVE","MS_COMMENTS":"Method duration was 30 min with polarity switching data-dependent Top 5method for both positive and negative modes. Spray voltage for both positive and negative modes was 3.5kV and the capillary temperature was set to 320 ⁰C with a sheath gas rate of 35, aux gas of 10, and max spray current of 100 μA. The full MS scan for both polarities utilized 120,000 resolution with an AGC target of 3e6 and a maximum IT of 100 ms, and the scan range was from 67-1000 m/z. Tandem MS spectra for both positive and negative modes used a resolution of 15,000, AGC target of 1 e5, maximum IT of 50 ms, isolation window of 0.4 m/z, isolation offset of 0.1 m/z, fixed first mass of 50 m/z, and 3-way multiplexed normalized collision energies (nCE) of 10, 35, 80. The minimum AGC target was 1e4 with an intensity threshold of 2e5. All data were acquired in profile mode."},

"MS_METABOLITE_DATA":{
"Units":"intensity",

"Data":[{"Metabolite":"1-Methylnicotinamide","CTR 100 1":"131640","CTR 100 2":"131251","CTR 100 3":"218159","KO 100 5":"113737","KO 100 1":"0","KO 100 2":"114556","KO 100 3":"0","KO 100 4":"145882","CTR 40 1":"180805","CTR 40 2":"0","CTR 40 3":"239377","CTR 40 4":"0","CTR 40 5":"0","KO 40 1":"0","KO 40 2":"0","KO 40 3":"123078","KO 40 4":"0","KO 40 5":"167160","KO 40 6":"126566","CTR 40 6":"188769","CTR day 200 1":"0","CTR day 200 2":"0","CTR day 200 3":"0","CTR day 200 4":"0","KO day 200 1":"0","KO day 200 2":"0","KO day 200 3":"0","KO day 200 4":"0","KO day 200 5":"0","CTR day 200 5":"52762","CTR day 200 6":"56850","CTR day 200 7":"72939","KO day 200 6":"48300","KO day 200 7":"0","KO day 200 8":"30471"},{"Metabolite":"2,3-Diphosphoglyceric acid","CTR 100 1":"0","CTR 100 2":"0","CTR 100 3":"0","KO 100 5":"0","KO 100 1":"0","KO 100 2":"0","KO 100 3":"0","KO 100 4":"0","CTR 40 1":"0","CTR 40 2":"0","CTR 40 3":"0","CTR 40 4":"0","CTR 40 5":"0","KO 40 1":"0","KO 40 2":"0","KO 40 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